Uso de una línea celular comercial para identificar el virus de la PPA en muestras clínicas

Actualmente no hay vacunas disponibles para prevenir el virus de la peste porcina africana (VPPA), y generalmente el control de brotes se basa en la cuarentena y la eliminación de animales infectados o expuestos. Hasta ahora, la detección eficaz del VPPA vivo requería recoger células sanguíneas de un cerdo vivo para cada prueba diagnóstica. En este estudio se informa sobre una nueva manera de detectar la presencia de VPPA vivo que minimiza la necesidad de recoger muestras de animales vivos y facilita el acceso a laboratorios veterinarios que necesitan diagnosticar el virus. La Rt-PCR o PCR cuantitativa (qPCR) es un método consolidado para la detección y cuantificación de grandes cantidades de muestras clínicas de VPPA. También existen pruebas de detección de anticuerpos con lectura colorimétrica, pero la producción de anticuerpos se produce días después de la detección del virus en muestras clínicas. En el diagnóstico de VPPA, ante una rt-PCR positiva es necesario confirmar el aislamiento del virus antes de considerar la muestra como positiva. Antes de este estudio, el único tipo celular disponible para validar una prueba rt-PCR positiva eran los macrófagos porcinos primarios.

En la investigación se descubrió que las células MA-104 podrían usarse para analizar la presencia de VPPA infeccioso, con una sensibilidad de aproximadamente un log menos que los macrófagos porcinos primarios, pero con una sensibilidad de aproximadamente un log más que la rt-PCR. MA-104 es una línea celular disponible comercialmente, aislada a partir de células epiteliales renales de Cercopithecus aethiops y comúnmente utilizada para el diagnóstico de PRRS y la producción de rotavirus de simios. Las células MA-104 tienen un tiempo de duplicación de 72 h, no tienen requisitos especiales de medios de cultivo y se congelan fácilmente, cualidades necesarias durante situaciones de brotes en las que se procesa una gran cantidad de muestras clínicas para determinar la presencia de VPPA infeccioso o simplemente ADN de VPPA. Además, la capacidad de las células MA-104 de hemadsorción (HA) clara ayudará en el diagnóstico rápido de VPPA. En ausencia de una fuente de glóbulos rojos, las células MA-104 pueden teñirse claramente para detectar la presencia de VPPA utilizando anticuerpos anti-VPPA, lo que también es útil para confirmar la presencia de VPPA en algunos aislados naturales que pueden no hacer HA debido a una mutación en CD2. Esta tinción clara de células infectadas por VPPA es una ventaja sobre el uso de macrófagos porcinos como sustrato, ya que los macrófagos porcinos tienen actividad peroxidasa, que causa una elevada acumulación de células no infectadas, aumentando la posibilidad de omitir un resultado positivo o confirmar un falso positivo.

Los estudios preliminares demostraron que es posible aislar VPPA de muestras de sangre infectadas, lo que indica que MA-104 es también un buen sustrato para el aislamiento directo en muestras clínicas.