Evaluación de métodos de descontaminación de embriones producidos in vitro
M Bureau, S Dea, MA Sirard. Evaluation of virus decontamination techniques for porcine embryos produced in vitro. 2005. Theriogenology. Vol. 63 (9):2343-55
01-jun-2005 (hace 19 años 7 meses 11 días)El objetivo de este estudio fue intentar descontaminar embriones contaminados
de forma natural o experimental con diferentes virus.
Los embriones en etapa de mórula y blastocisto fueron expuestos durante 1h al virus de la encefalomiocarditis (EMCV), al PCV2, PPV, PRRSV y BVDV a un nivel de 100 TCID(50)/ml. Las muestras fueron tratadas mediante diferentes procedimientos que incluían las siguientes soluciones estándares de lavado: PBS-BSA al 0,4% (cinco veces durante 10’’), solución de Hank + tripsina al 0,25% (dos veces durante 60-90’’ o 120-150’’ ó una vez durante 5’), solución de Hank + 0,1mg/ml de DNAasa 1 + 20U/ml de una RNAasa comercial (derivada de E. coli) durante 30’ ó con PBS + 0,4% de BSA (cinco veces, durante 10’’). Para mejorar el tratamiento con tripsina se usaron dos tratamientos: 0,1% de hialuronidasa (un lavado de 5’) en lugar de tripsina o una preincubación con células oviductales. En el primer experimento, los oocitos recibieron tratamientos estándar de maduración y en el segundo, fueron coincubados con células oviductales durante las 3 últimas horas.
La eficacia de las diversas técnicas de lavado para descontaminar virus se evaluó mediante PCR. En el primer experimento, el tratamiento de tripsina no eliminó PRRSV, PPV, PCV ni EMCV. Inesperadamente, la hialuronidasa eliminó todos los virus. En el segundo experimento, se eliminaron todos los virus tras los diversos tratamientos enzimáticos. Como conclusión, la descontaminación in vitro de embriones es más eficaz si se exponen a las secreciones oviductales y la hialuronidasa eliminó más virus que la tripsina.
Los embriones en etapa de mórula y blastocisto fueron expuestos durante 1h al virus de la encefalomiocarditis (EMCV), al PCV2, PPV, PRRSV y BVDV a un nivel de 100 TCID(50)/ml. Las muestras fueron tratadas mediante diferentes procedimientos que incluían las siguientes soluciones estándares de lavado: PBS-BSA al 0,4% (cinco veces durante 10’’), solución de Hank + tripsina al 0,25% (dos veces durante 60-90’’ o 120-150’’ ó una vez durante 5’), solución de Hank + 0,1mg/ml de DNAasa 1 + 20U/ml de una RNAasa comercial (derivada de E. coli) durante 30’ ó con PBS + 0,4% de BSA (cinco veces, durante 10’’). Para mejorar el tratamiento con tripsina se usaron dos tratamientos: 0,1% de hialuronidasa (un lavado de 5’) en lugar de tripsina o una preincubación con células oviductales. En el primer experimento, los oocitos recibieron tratamientos estándar de maduración y en el segundo, fueron coincubados con células oviductales durante las 3 últimas horas.
La eficacia de las diversas técnicas de lavado para descontaminar virus se evaluó mediante PCR. En el primer experimento, el tratamiento de tripsina no eliminó PRRSV, PPV, PCV ni EMCV. Inesperadamente, la hialuronidasa eliminó todos los virus. En el segundo experimento, se eliminaron todos los virus tras los diversos tratamientos enzimáticos. Como conclusión, la descontaminación in vitro de embriones es más eficaz si se exponen a las secreciones oviductales y la hialuronidasa eliminó más virus que la tripsina.