Experiencia práctica: capacidad de detección de la infección por PRRS en verracos según el tipo de muestra

Una de las posibles vías de transmisión del virus PRRS, y que genera mayor impacto, es la entrada de dosis de semen procedentes de verracos infectados. Una de las claves para reducir el riesgo que representa esta vía de diseminación es un adecuado programa de monitorización en el centro de inseminación. Generalmente se utiliza la técnica PCR para determinar la presencia o ausencia del virus en muestras biológicas de los verracos, y probablemente la elección del tipo de muestra a analizar es uno de los puntos críticos que determinará el éxito del programa implementado en el centro.

Existen distintas publicaciones científicas que indican las siguientes particularidades en la dinámica de infección y excreción del virus PRRS en verracos:

• La detección en sangre es generalmente anterior a la detección en semen.
• La excreción por vía seminal es:
  • Errática: no en todos los verracos con viremia se detecta el virus en semen
  • Intermitente: la fase de excreción puede prolongarse durante meses

El semen por sus características, como es la presencia de inhibidores de la PCR, puede dificultar la realización de la técnica PCR.

De esta forma parecería que la muestra idónea sería la extracción de sangre, pero la extracción convencional de sangre por la vena femoral de forma rutinaria y frecuente puede generar problemas en el bienestar de los verracos por el riesgo de flebitis en el punto de punción.

Para reducir esta problemática, existen posibles alternativas a este tipo de muestreo como pueden ser:

• Hisopo nasal u oral,
• Punción con aguja de bajo calibre y posterior recogida de la sangre con hisopo sin medio.

Para valorar la eficacia de las posibles muestras y técnicas a introducir en un programa de monitorización en verracos, se determinó la positividad y carga viral de forma individual con la técnica PCR, en un lote de 30 verracos de una explotación que se había infectado con virus PRRS, a partir de las siguientes muestras:

• Sangre de extracción convencinal con tubo al vacío mediante punción en la vena femoral. (Foto 1)
• Hisopo sanguíneo obtenido mediante micropunción en la vena auricular e introducción del hisopo en 0.5 ml de solución salina estéril. (Foto 3)
• Sangre de tarjeta FTA^® obtenida por micropunción en la vena auricular (Foto 4)
• Hisopo oral o de saliva
• Semen sin diluir.

Los resultados determinaron que:

• El 93% de los verracos resultaron positivos en la muestra de sangre de la extracción convencional en la vena femoral.
• El 90% de los verracos resultaron positivos en el hisopo de sangre de micropunción. Las cargas virales fueron inferiores a las obtenidas en el tubo de sangre y un verraco fue positivo en la sangre de extracción convencional y negativo al hisopo de sangre..
• El 25% de las muestras de semen resultaron positivas. Los verracos positivos en semen eran todos virémicos y además eran los que presentaban cargas virales mayores en sangre. Las cargas virales en semen fueron inferiores comparadas con las cargas virales en sangre de los mismos verracos.
• El 33% de los verracos fueron positivos con el hisopo oral. Las cargas virales de los positivos fueron inferiores respecto a las cargas virales en sangre.
• El 23% de las tarjetas FTA^® resultaron positivas con cargas virales bajas. De la misma manera que ocurre en las muestras de semen,los animales que fueron positivos a las tarjetas FTA^® eran los que presentaban cargas virales más altas en las muestras de sangre obtenidas por el método convencional.

Conclusiones y perspectivas de futuro

• Para una detección precoz de la presencia del virus, un programa basado solamente en muestreos de semen puede aumentar el tiempo de detección.
• Las cargas virales bajas en muestras de semen pueden generar resultados falsos negativos a la PCR dependiendo de factores como la dilución del semen recolectado, homogeneidad de la muestra tomada, capacidad de detección del kit PCR, protocolo de PCR utilizado, etc.
• El hisopo de sangre obtenido por micropunción puede ser una buena alternativa a la toma de muestras de sangre convencional. Estudios futuros pueden determinar cómo aumentar la capacidad de detección según el tipo de hisopo utilizado para conseguir una mayor absorción de sangre y según la cantidad de suero salino estéril donde se introduce el hisopo para reducir la dilución.
• Las tarjetas FTA^® no parecen ser un buen tipo de muestra según los resultados de este estudio, aunque el hecho que se detecte positividad cuando la carga viral en sangre es alta, anima a estudios futuros enfocados en mejorar el protocolo de muestreo y extracción de la fracción sanguínea de la tarjeta.