Producción de embriones porcinos modificados genéticamente mediante lipofección de ovocitos con zona pelúcida intacta usando el sistema CRISPR/Cas9

La producción de cerdos modificados genéticamente tiene una importante repercusión gracias a sus aplicaciones en investigación básica, biomedicina y producción cárnica. La clonación fue la primera técnica utilizada para esta finalidad, aunque se han desarrollado otros métodos más fáciles y económicos, como la microinyección, la electroporación o la lipofección de ovocitos y cigotos. En este estudio, se analizó la producción de embriones modificados genéticamente mediante lipofección de ovocitos con zona pelúcida intacta usando Lipofectamine^TM CRISPRMAX^TM Cas9 en comparación con el método de electroporación. Se evaluaron dos factores: el incremento en la concentración de los complejos lipofectamina–ribonucleoproteína (LRNPC) (5% vs. 10%) y la concentración de ribonucleoproteína dentro de los complejos (1xRNP vs. 2xRNP).

Se observó que el incremento en la concentración de LRNPC tuvo un efecto perjudicial sobre el desarrollo embrionario y un efecto posterior sobre el número de embriones mutantes. El grupo del 5% tuvo una tasa de blastocitos mutantes similar al método de electroporación (5,52% y 6,38%, respectivamente). El incremento en la concentración de la ribonucleoproteína dentro de los complejos no tuvo efecto sobre la tasa de blastocitos y la tasa de mutación, siendo la tasa de blastocistos mutantes similar tanto en los grupos de lipofección 1xRNP y 2xRNP como en el grupo de electroporación (1,75%, 3,60% y 3,57%, respectivamente).

En conclusión, se demuestra que es posible producir embriones knock-out mediante lipofección de ovocitos porcinos con zona pelúcida intacta con eficiencias similares a las de la electroporación, aunque es necesaria una mayor optimización, principalmente en términos del uso de vesículas más eficientes para la encapsulación con diferentes composiciones.