Cambios en la abundancia de Lactobacillus spp. y Streptococcus suis en el estómago, yeyuno e ileon de los lechones destetados
Y Su, W Yao, ON. Perez-Gutierrez, H Smidt y WY Zhu 2008 Federation of European Microbiological Societies. 66: 546-555.
27-ago-2009 (hace 15 años 3 meses 25 días)El objetivo del presente estudio fue determinar los cambios en la comunidad bacteriana debidos al destete, con énfasis especial sobre las poblaciones de Lactobacillus spp. y Streptococcus suis como indicadores de grupos potencialmente beneficiosos o perjudiciales, en estómago, yeyuno e ileon de los lechones tras el destete (21 días post-parto) mediante metodologías basadas en la secuencia génica 16S rRNA.
Se escogieron tres camadas de lechones sanos (10-11 lechones por camada) de una granja comercial de una línea genética (Landrace-Yorkshire-Duroc). Todos los lechones se destetaron a los 21 días de vida. En el día del destete, las cerdas se separaron de los lechones, mientras los lechones permanecieron en los mismos corrales donde habían nacido. Los lechones fueron alimentados ad libitum con una dieta sin adición alguna de antibióticos. Los lechones disponían también de acceso libre e ilimitado al agua de bebida. Los días 7, 14, 21, 24 y 35 de vida se sacrificó un lechón por camada para la recogida de muestras de contenidos digestivos a nivel de estómago, yeyuno e ileon (aproximadamente a la mitad de estos segmentos) y se mantuvieron congeladas a -20ºC para el análisis molecular. Para analizar la microbiota ligada a la mucosa del yeyuno, se drenó el fluido del lumen, se cortaron segmentos intermedios de yeyuno (3-4 cm) que fueron lavados con búfer fosfatasa salina (PBS; pH 7,0) e inmediatamente congelados con nitrógeno líquido y almacenados a -20ºC. Las muestras de mucosa fueron recogidas de los tejidos congelados después de la descongelación rasgando la superficie luminal con un porta de cristal estéril.
El análisis mediante electroforesis en gel con gradiente de desnaturalización mostró que, después del destete, las bandas predominantes de Lactobacillus spp. desaparecen y son remplazadas por especies potencialmente patogénicas como, Peptostreptococcus anaerobius, Moraxella cuniculi, S. suis y Porphyromonas catoniae. La PCR a tiempo real reveló que la abundancia de Lactobacillus y Lactobacillus sobrius como proporción de la abundancia bacteriana total fue significativamente inferior (P<0,05) en el estómago, yeyuno e ileon de los lechones destetados que en los lechones a día 21 de vida. Se desarrolló una PCR a tiempo real precisa y sensible para cuantificar patógenos importantes como S. suis en muestras de microbiota gastrointestinal. Esta prueba demostró la predominancia de S. suis en las muestras de contenido intestinal de los lechones destetados con unos niveles poblacionales por encima de las 107 unidades/g de contenido digestivo, mientras no fueron detectados en contenidos digestivos antes del destete. El Streptococcus suis no fue dominante en los contenidos digestivos de yeyuno e ileon antes del destete, pero presentó dominancia post-destete, con valores poblacionales de más de 107 unidades/g de contenido digestivo.
Los resultados demostraron la dominancia del patógeno potencial Streptococcus suis desde el primer momento post-destete. Estos resultados también sugieren que la barrera de defensa que representa el estómago puede ser rebasada ya que S. suis se presenta como dominante mientras la proporción de Lactobacillus se reduce después del destete.
Se escogieron tres camadas de lechones sanos (10-11 lechones por camada) de una granja comercial de una línea genética (Landrace-Yorkshire-Duroc). Todos los lechones se destetaron a los 21 días de vida. En el día del destete, las cerdas se separaron de los lechones, mientras los lechones permanecieron en los mismos corrales donde habían nacido. Los lechones fueron alimentados ad libitum con una dieta sin adición alguna de antibióticos. Los lechones disponían también de acceso libre e ilimitado al agua de bebida. Los días 7, 14, 21, 24 y 35 de vida se sacrificó un lechón por camada para la recogida de muestras de contenidos digestivos a nivel de estómago, yeyuno e ileon (aproximadamente a la mitad de estos segmentos) y se mantuvieron congeladas a -20ºC para el análisis molecular. Para analizar la microbiota ligada a la mucosa del yeyuno, se drenó el fluido del lumen, se cortaron segmentos intermedios de yeyuno (3-4 cm) que fueron lavados con búfer fosfatasa salina (PBS; pH 7,0) e inmediatamente congelados con nitrógeno líquido y almacenados a -20ºC. Las muestras de mucosa fueron recogidas de los tejidos congelados después de la descongelación rasgando la superficie luminal con un porta de cristal estéril.
El análisis mediante electroforesis en gel con gradiente de desnaturalización mostró que, después del destete, las bandas predominantes de Lactobacillus spp. desaparecen y son remplazadas por especies potencialmente patogénicas como, Peptostreptococcus anaerobius, Moraxella cuniculi, S. suis y Porphyromonas catoniae. La PCR a tiempo real reveló que la abundancia de Lactobacillus y Lactobacillus sobrius como proporción de la abundancia bacteriana total fue significativamente inferior (P<0,05) en el estómago, yeyuno e ileon de los lechones destetados que en los lechones a día 21 de vida. Se desarrolló una PCR a tiempo real precisa y sensible para cuantificar patógenos importantes como S. suis en muestras de microbiota gastrointestinal. Esta prueba demostró la predominancia de S. suis en las muestras de contenido intestinal de los lechones destetados con unos niveles poblacionales por encima de las 107 unidades/g de contenido digestivo, mientras no fueron detectados en contenidos digestivos antes del destete. El Streptococcus suis no fue dominante en los contenidos digestivos de yeyuno e ileon antes del destete, pero presentó dominancia post-destete, con valores poblacionales de más de 107 unidades/g de contenido digestivo.
Los resultados demostraron la dominancia del patógeno potencial Streptococcus suis desde el primer momento post-destete. Estos resultados también sugieren que la barrera de defensa que representa el estómago puede ser rebasada ya que S. suis se presenta como dominante mientras la proporción de Lactobacillus se reduce después del destete.