Diagnóstico laboratorial: Mycoplasma hyopneumoniae

Test disponibles:

Patología macroscópica

• Inspección visual de lesiones pulmonares.

• Pros:
  • Fácil de hacer.
  • Puede evaluar infecciones tardías en cerdos enviados al matadero.
• Contras:
  • No diagnóstico/patognomónico; muchas otras posibles causas.
  • Requiere otra confirmación diagnóstica.

Cultivo bacteriano

• Aislamiento de organismos vivos a partir de tejidos con lesiones o lavado broncoalveolar.
• Tipos de muestras: pulmón o lavado broncoalveolar.
• Pros:
  • Criterio de referencia.
  • Los cerdos pueden dar positivo durante 7-8 meses (largo período de colonización).
• Contras:
  • Requiere un medio de cultivo especial (medio Friis).
  • Solo disponible en muy pocos laboratorios.
  • Caro.
  • Muy difícil de cultivar (muchos falsos negativos).

Inmunohistoquímica (IHC)

• Detecta la presencia de antígeno bacteriano.
• Tipo de muestra: tejido pulmonar.
• Pros:
  • Detecta bacterias en el sitio de la lesión (buena prueba de causalidad).
  • Los cerdos pueden dar positivo durante 7-8 meses (largo período de colonización).
• Contras:
  • Tiene que enviarse la muestra de tejido correcta – el tejido pulmonar debe contener una sección transversal de las vías respiratorias (células epiteliales bronquiales).
  • Requiere que haya una cantidad de bacterias significativamente mayor que la PCR.
  • Solo evalúa una pequeña cantidad de tejido.

Anticuerpos fluorescentes (FA)

• Detecta la presencia de antígeno bacteriano.
• Tipo de muestra: tejido pulmonar.
• Pros:
  • Detecta al virus en el sitio de la lesión (buena prueba de causalidad).
  • Los cerdos pueden dar positivo durante 7-8 meses (largo período de colonización).
• Contras:
  • Tiene que enviarse la muestra de tejido correcta – el tejido pulmonar debe contener una sección transversal de las vías respiratorias (células epiteliales bronquiales)(Figura 2).
  • Requiere que haya una cantidad de bacterias significativamente mayor que la PCR.
  • Sólo evalúa una pequeña cantidad de tejido.

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

• Detecta la presencia de secuencias específicas de ácido nucleico bacteriano (ADN).
• Tipos de muestras: pulmón, hisopo (nasal, laríngeo, traqueobronquial o bronquial) o lavado broncoalveolar.
• Pros:
  • Sensibilidad muy alta (puede detectar pequeñas cantidades de bacteria)
  • Se pueden combinar múltiples muestras para aumentar la sensibilidad diagnóstica al hacer un diagnóstico de granja.
  • Los cerdos pueden dar positivo durante 7-8 meses (largo período de colonización).
  • Coste moderado.
• Contras:
  • No demuestra la enfermedad.
  • Los fluidos orales son un tipo de muestra deficiente (muchos falsos negativos)

Tabla 1: Resumen esquemático de la investigación y los resultados de campo sobre la sensibilidad de diferentes tipos de muestras para las pruebas de PCR de Mycoplasma hyopneumoniae.

	Sensibilidad relativa	Pooling*
Fluidos orales	-	No
Hisopo nasal	+	Variable
Hisopo laríngeo	++	Beneficioso
Hisopo traqueobronquial	++	Beneficioso
Hisopo bronquial	+++	Beneficioso
Lavado broncoalveolar	++	No
Tejido pulmonar	++++	Sí

* El pooling o agrupar muestras puede ser beneficioso para aumentar la sensibilidad diagnóstica al realizar un diagnóstico de granja; no de un solo cerdo.

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta la presencia de anticuerpos.
• Tipo de muestra: suero.
• Pros:
  • Los animales permanecen positivos durante mucho tiempo.
  • Puede utilizarse en casos crónicos.
• Contras:
  • Los anticuerpos específicos y el momento de la detección pueden variar ligeramente entre los distintos kits comerciales disponibles.
  • No diferencia entre anticuerpos maternales y los de exposición.
  • El nivel de anticuerpos no se correlaciona con la protección.
  • La vacunación no induce seroconversión (depende en gran medida de la vacuna y el ensayo utilizado).
  • Muchos cerdos infectados no seroconvierten.
  • Los anticuerpos no siempre se detectan durante todo el período de la infección.
  • Cierta reactividad cruzada con otros Mycoplasmas, especialmente M. flocculare, que no es patógeno y se encuentra comúnmente en cerdos.

Interpretación de resultados:

Patología macroscópica:

• Positivo: La patología macroscópica del pulmón puede proporcionar un posible diagnóstico.
• Negativo: Los casos tempranos por lo general no se manifiestan con lesiones pulmonares extensas.

Cultivo bacteriano:

• Positivo: Confirma la enfermedad.
• Negativo: Negativo, la bacteria no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección o del uso de antibióticos, o simplemente no puede crecer debido al crecimiento excesivo de otras bacterias (presente pero muy difícil de cultivar).

IHC:

• Positivo: La bacteria está presente en el sitio de la lesión.
• Negativo: Negativo o infección demasiado antigua para detectar la bacteria o animal tratado previamente con antibióticos.

FA:

• Positivo: La bacteria está presente en el sitio de la lesión.
• Negativo: Negativo o infección demasiado antigua para detectar la bacteria o animal tratado previamente con antibióticos.

PCR:

• Positivo: La bacteria está presente; no confirma la enfermedad.
• Negativo: Negativo o infección demasiado antigua para detectar la bacteria o animal tratado previamente con antibióticos.

ELISA:

• Positivo: Anticuerpos maternales o exposición anterior (normalmente de 3 a 8 semanas post-exposición) a vacuna o bacteria de campo.
• Negativo: Negativo o infección que no estimula la seroconversión o demasiado reciente para ser detectada (generalmente tarda de 3 a 8 semanas post-exposición).

Escenarios

Cerdos de engorde con tos crónica:

• Necropsia 1-3 cerdos muertos recientemente o eutanasia cerdos con tos. Evalúa macroscópicamente los pulmones en busca de consolidación craneoventral. Recoge varios trozos de pulmón (asegúrate de incluir las vías respiratorias en la muestra) y fíjalos en formol para IHC o FA.
• El porcentaje de pulmón con lesiones está directamente relacionado con el impacto económico de la enfermedad.

Confirmar que los animales de reposición son negativos a Mycoplasma hyopneumoniae

• Asegúrate de que no haya signos clínicos de tos.
• Recoge al menos 30 muestras aleatorias de suero de la reposición y analízalas mediante ELISA.

Vigilar la excreción en la reposición antes de introducirla en una granja de reproductoras positiva o negativa

• Asegúrate de que no haya signos clínicos de tos.
• Recoge al menos 30 muestras aleatorias de hisopo laríngeo de la reposición. Mezclarlas en grupos de 5 o 6 y analizar mediante PCR.