Valoración de la inmunidad de las cerdas de reposición en una explotación estable a PRRS

Introducción

Como parte de las numerosas investigaciones encaminadas a profundizar en el conocimiento sobre PRRS en cerdos, recientemente se ha propuesto una nueva aproximación a la evaluación en campo de la respuesta inmune mediante el análisis de los anticuerpos específicos en el fluido oral. Este método diagnóstico es muy interesante ya que permite una fácil recolección con métodos no invasivos, respetuosos con el bienestar animal. También comporta un considerable ahorro de tiempo de trabajo para el personal de la granja respecto a la extracción de sangre, que es difícil de realizar en animales muy grandes.

 

Granja

El estudio se ha llevado a cabo en una granja de cerdas, estable a PRRS, cuyo objetivo es la venta de cerdos entre 30 y 35 kg de peso vivo. El número de cerdas en producción es de 350-400 como máximo. Hace años que es positiva a PRRSv y efectúan una vacunación inicial de la reposición con vacuna viva atenuada hacia los 140 días de vida y un recuerdo con vacuna inactivada 3 semanas después.

 

Diseño del estudio

Se seleccionaron ocho cerditas de reposición, de 3 grupos consecutivos, que fueron identificadas y alojadas juntas y se muestrearon en los siguientes tiempos: T1 = día 1 (día siguiente a la llegada en un local apartado de la granja), T2 = día 49 (salida del local para pasar a la granja), T3 = día 63, T4 = día 77, T5 = día 91 y T6  = día 105. En cada muestreo se tomó sangre y fluidos orales del grupo mediante una cuerda.

Recogida de fluido oral en un local apartado de la granja de cerdas el día después de su llegada.

Recogida en el momento de salir del local de llegada para pasar a la granja.

Recogida al finalizar el experimento, en el corral. ¡Presentación manual de la cuerda!

 

Resultados

El estado clínico de las cerditas fue satisfactorio durante todo el experimento, así como los parámetros productivos y reproductivos de la granja durante el año en el que se ha realizado la prueba de campo (abortos, tasa de parto, destetados/cerda/año). Las cerditas examinadas se infectaron por PRRSv a las 7-9 semanas de la llegada a la granja (tabla 1). La cinética de formación de anticuerpos séricos coincidió con la de los anticuerpos IgA e IgG en el líquido oral del grupo 1 y 2. En el grupo 3 sólo se correlacionó con las IgG del líquido oral.

Sin embargo no se detectó ninguna positividad en la Real-time RT-PCR ni en el suero de los animales individuales ni del líquido oral del grupo.

 

Tabla 1. Respuesta de anticuerpos (suero y líquidos orales) al virus PRRS.

Grupo 1

	Muestra 1 (0d)	Muestra 2 (49d)	Muestra 3 (63d)	Muestra 4 (77d)	Muestra 5 (91d)	Muestra 6 (105d)
Suero: media s/p	0	0,35	NE	0,92	0,76	0,86
Sueros positivos / total	0/8	3/8	NE	8/8	7/8	8/8
FO: s/p test IgA	0 (NEG)	0,61 (POS)	NE	0,49 (DUD)	0,87 (POS)	0,75 (POS)
FO: s/p test IgG	0,10 (NEG)	1,83 (POS)	NE	1,04 (POS)	1,16 (POS)	1,06 (POS)

Grupo 2

	Muestra 1 (0d)	Muestra 2 (49d)	Muestra 3 (63d)	Muestra 4 (77d)	Muestra 5 (91d)	Muestra 6 (105d)
Suero: media s/p	0,01	0,08	0,93	1,11	1,03	NE
Suero positivo / total	0/8	1/8 *	8/8	8/8	8/8	NE
FO: s/p test IgA	0,02 (NEG)	0,21 (NEG)	0,91 (POS)	0,53 (DUD)	0,49 (DUD)	NE
FO: s/p test IgG	0,12 (NEG)	0,23 (NEG)	0,84 (POS)	1,09 (POS)	0,86 (POS)	NE

Gruppo 3

	Muestra 1 (0d)	Muestra 2 (49d)	Muestra 3 (63d)	Muestra 4 (77d)	Muestra 5 (91d)	Muestra 6 (105d)
Suero: media s/p	0	0,05	0,11	0,89	0,83	0,75
Suero positivo / total	0/8	0/7	1/7	7/7	7/7	6/7
LO: s/p test IgA	0 (NEG)	0 (NEG)	0,17 (NEG)	0,07 (NEG)	0,27 (NEG)	0,80 (POS)
LO: s/p test IgG	0,04 (NEG)	0,03 (NEG)	0,28 (NEG)	0,50 (POS)	1,00 (POS)	0,77 (POS)

Muestra 1: El día después de la llegada a un local separado de la granja. Muestra 2: al salir del local de llegada y pasar a la granja, tras 7 semanas. Muestra 3-6: cada 2 semanas, hasta el día 105 de la llegada (4,5 meses de vida). Este diseño experimental se llevó a cabo para revelar el tiempo de infección, considerando que durante las 7 primeras semanas no había ningún contacto con el virus.
LO: líquido oral. NEG: negativo. POS: positivo. DUD: dudoso.
*1 sólo muestras con s/p 0,4 (valor umbral). NE: no realizado. d: día.

 

Discusión y conclusión

El control sanitario de PRRS basado en la toma de fluidos orales ha demostrado ser preciso y oportuno con unos requisitos logísticos y organizativos muy reducidos respecto a la extracción de sangre de animales individuales. Los datos también muestran que pueden ser suficientes 1-2 animales seropositivos de un grupo de 8-10 para positivizar la muestra de líquido oral del grupo. En este sentido, no hubo retrasos sustanciales en el diagnóstico respecto a la serología. Cabe destacar que la recogida de fluidos orales mediante una cuerda debe modularse en función de la edad de los animales (o de su tamaño), ya sea en el tiempo o en la modalidad de exposición.

En nuestro estudio, la detección de la respuesta de anticuerpos en el líquido oral ha demostrado ser más robusta respecto a la demostración del virus en el suero o en el líquido oral mediante RT-PCR. Hay que destacar que la aclimatación de las cerditas en este complejo se realiza en dos fases: A) las 7 primeras semanas en un local apartado de la granja de cerdas sin recirculación viral; B) el periodo dentro de la nave de cubrición, donde se realiza el contacto con los animales en condiciones de muy baja circulación viral. En estas condiciones de presión infectiva muy reducida, las cerditas no fueron nunca positivas mediante Real-time PCR por diversos posibles motivos: 1) El momento de la toma de muestra no  coincidió con un pico de viremia. 2) La sonda utilizada era muy diferente del virus circulante (aunque había sido validado en la granja antes del estudio). 3) Degradación del RNA viral antes de la extracción pese a las precauciones adoptadas.

Es interesante notar que el test IFN-gamma (Dotti et al., 2011; inmunidad mediada por células frente a PRRSv) dió resultado según los tests de anticuerpos mostrados en la tabla 1 (datos no publicados). Por lo tanto, en las granjas estables es razonable esperar una estabilización de la positividad de anticuerpos en el tiempo, que debería traducirse en títulos moderados s/p y en un equilibrio tras la respuesta de IgA e IgG en el líquido oral. Las condiciones anteriores no se producen en las granjas inestables, que tienen ciclos repetidos de infección (ver figura 1). En estas condiciones de inestabilidad, el esquema de control propuesto revelará los ciclos sucesivos de viremia y de respuesta de anticuerpos tanto en el suero como en el líquido oral, asociados a falta de respuesta inmunitaria mediada por células (test IFN-gamma).

 

Figura 1. Infección por PRRSv en una granja inestable.

El test de campo en una granja inestable ha sido publicado anteriormente (Dotti et al., 2013). Se trata de un estudio de cohortes en un grupo de cerdas de reposición. La gráfica A indica el número de cerditas con y sin viremia en diversos tiempos. La gráfica B indica la evolución del título de anticuerpos séricos en el tiempo. Las flechas de la gráfica A indican las 3 sucesivas olas de infección que se han producido en la granja.