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La producción de cerdos modificados genéticamente tiene una importante repercusión gracias a sus aplicaciones en investigación básica, biomedicina y producción cárnica. La clonación fue la primera técnica utilizada para esta finalidad, aunque se han desarrollado otros métodos más fáciles y económicos, como la microinyección, la electroporación o la lipofección de ovocitos y cigotos. En este estudio, se analizó la producción de embriones modificados genéticamente mediante lipofección de ovocitos con zona pelúcida intacta usando LipofectamineTM CRISPRMAXTM Cas9 en comparación con el método de electroporación. Se evaluaron dos factores: el incremento en la concentración de los complejos lipofectamina–ribonucleoproteína (LRNPC) (5% vs. 10%) y la concentración de ribonucleoproteína dentro de los complejos (1xRNP vs. 2xRNP).
Se observó que el incremento en la concentración de LRNPC tuvo un efecto perjudicial sobre el desarrollo embrionario y un efecto posterior sobre el número de embriones mutantes. El grupo del 5% tuvo una tasa de blastocitos mutantes similar al método de electroporación (5,52% y 6,38%, respectivamente). El incremento en la concentración de la ribonucleoproteína dentro de los complejos no tuvo efecto sobre la tasa de blastocitos y la tasa de mutación, siendo la tasa de blastocistos mutantes similar tanto en los grupos de lipofección 1xRNP y 2xRNP como en el grupo de electroporación (1,75%, 3,60% y 3,57%, respectivamente).
En conclusión, se demuestra que es posible producir embriones knock-out mediante lipofección de ovocitos porcinos con zona pelúcida intacta con eficiencias similares a las de la electroporación, aunque es necesaria una mayor optimización, principalmente en términos del uso de vesículas más eficientes para la encapsulación con diferentes composiciones.
Piñeiro-Silva C, Navarro-Serna S, Belda-Pérez R, Gadea J. Production of Genetically Modified Porcine Embryos via Lipofection of Zona-Pellucida-Intact Oocytes Using the CRISPR/Cas9 System. Animals. 2023; 13(3):342. https://doi.org/10.3390/ani13030342