Diagnóstico laboratorial: Enfermedad de Aujeszky (Pseudorabia - PRV)

Test disponibles:

Inmunohistoquímica (IHC)

• Detecta la presencia de antígenos virales.
• Tipos de muestra: tejidos.
• Pros:
  • Detecta al virus en el sitio de la lesión (buena prueba de causalidad).
  • Cualquier resultado positivo se considera significativo.
• Contras:
  • Tiene que enviarse la muestra de tejido correcta.
  • Requiere que haya una cantidad de virus significativamente mayor que la PCR.
  • Solo evalúa una pequeña cantidad de tejido.
  • Es probable que se pasen por alto las infecciones latentes a menos que se incluyan el nervio trigémino y/o las tonsilas.

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

• Detecta la presencia de secuencias específicas de ácido nucleico viral (ADN).
• Tipos de muestras: tejidos.
• Pros:
  • Alta sensibilidad.
  • La cuantificación por PCR se asocia con la presencia de lesiones.
  • Coste moderado:
    • A menudo se pueden combinar muestras de tejido para reducir el coste y minimizar la pérdida de sensibilidad (especialmente en lo que respecta a la relevancia clínica).
  • Algunos pruebas PCR pueden diferenciar entre virus vacunal con genes delecionados e infección por virus de campo.
• Contras:
  • Requiere muestras de tejido (postmortem) para obtener mejores resultados.
  • Es probable que se pasen por alto las infecciones latentes a menos que se incluyan el nervio trigémino y/o las tonsilas.

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta la presencia de anticuerpos.
• Tipos de muestras: suero.
• Pros:
  • Los animales permanecen positivos durante varias semanas.
  • Puede utilizarse en casos crónicos.
  • Puede utilizarse para diferenciar la exposición al virus de campo de la vacuna con genes delecionados (ver tabla 1).
  • Cualquier resultado positivo al virus de campo se considera significativo.
  • Los animales solo tardan entre 5 y 7 días en volverse seropositivos tras la exposición al virus de campo.

La tabla 1 ayuda a demostrar las capacidades DIVA (diferenciación entre animales infectados de vacunados) de algunos ensayos ELISA cuando se utiliza una vacuna con genes delecionados.

Resultado VN	Resultado de ELISA diferencial dirigido al gen delecionado gE / g1 o gB	Interpretación
Positivo	Positivo	Animal expuesto al virus de campo
Positivo	Negativo	Animal vacunado no expuesto al virus de campo
Negativo	Positivo	Error del ensayo, este resultado no es posible
Negativo	Negativo	Animal no vacunado y no expuesto al virus de campo

• Contras:
  • Se necesita hacer coincidir el ensayo adecuado con la deleción de genes apropiada en la vacuna.
  • Los animales tardan entre 10 y 14 días en volverse seropositivos después de la vacunación.

Neutralización viral (VN)

• Detecta la presencia de anticuerpos.
• Tipos de muestras: suero.
• Pros:
  • Los animales permanecen positivos durante varias semanas.
  • Puede utilizarse en casos crónicos.
  • Mayor sensibilidad que ELISA (puede detectar una menor concentración de anticuerpos).
• Contras:
  • No es factible para un gran número de muestras.
  • Los animales tardan 12 días en volverse seropositivos.
  • No distingue entre vacunación e infección por virus campo.
  • La fiabilidad depende mucho de la habilidad de los técnicos.
  • La reactividad depende del aislado de virus utilizado.

Interpretación de resultados:

IHC

• Positivo: El virus está presente en el sitio de la lesión.
• Negativo: Negativo o infección demasiado antigua para detectar el virus.

PCR

• Positivo: El virus está presente. La vacunación reciente con un virus vivo modificado puede dar lugar a PCR positivas.
• Negativo: Negativo o el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección.

ELISA (gen diana delecionado)

• Positivo: Anticuerpos maternales o exposición anterior (>5-7 días) al virus campo.
• Negativo: Negativo o infección demasiado reciente para ser detectada.

VN

• Positivo: Exposición anterior (> 5-14 días) a vacuna o virus de campo.
• Negativo:
  • Negativo a vacuna o virus de campo.
  • Infección demasiado temprana para poder detectarla (<5-7 días para virus de campo o <10-14 días para vacuna).

Escenarios

Granja de cerdas con abortos

• Recoge 6-8 fetos para hacer un pool de las muestras para PCR.
• Cerdas/nulíparas abortadas: Recoge suero de cerdas/nulíparas que han abortado recientemente para PCR. Pueden mezclarse en grupos de 5.
  • Se pueden realizar pruebas de ELISA de muestras individuales si >7 días después del aborto.
  • En granjas no vacunadas contra la enfermedad de Aujeszky es preferible realizar VN en lugar de ELISA debido a la mayor sensibilidad diagnóstica de la prueba.

Selección de nulíparas de reposición de granjas vacunadas con animales positivos conocidos

• Recoge muestras de sangre del 100% de las nulíparas de reposición y analízalas individualmente mediante ELISA y VN.
  • Quedarse solo los animales positivos a VN y negativos a ELISA (ver la Tabla 1 anterior)

Selección de nulíparas de reposición de granjas vacunadas sin animales positivos conocidos

• Recoge muestras de sangre de al menos 30 nulíparas de reposición seleccionadas al azar y analízalas individualmente mediante ELISA y VN.
  • Si todas las muestras analizadas son positivas a VN y negativas a ELISA (ver la Tabla 1 anterior), puedes quedarte todos los animales de la reposición.
  • Si alguna muestra es negativa a VN, se debe analizar el 100% de las nulíparas restantes y conservar únicamente las nulíparas vacunadas (VN = positivas).
  • Si alguna de las nulíparas es positiva para ELISA, reevaluar el valor de quedarse cualquier animal del grupo, ya que el resultado sugiere que la granja de origen ahora es positiva para la enfermedad de Aujeszky.