Diagnóstico de la infección causada por App

App puede causar tres tipos de infecciones:

1. agudas (mortalidad elevada o media)
2. crónicas (baja mortalidad, pocos signos clínicos y poco específicos, crecimiento reducido y/o lesiones en matadero)
3. subclínicas (sin signos clínicos, ni lesiones en matadero).

 

El diagnóstico de la forma aguda no suele ser complicado

• Los animales afectados acostumbran a tener lesiones pulmonares que son bastante patognomónicas de App. Deben tomarse muestras de los pulmones afectados y mandarlas al laboratorio.
   
• Cualquier técnico de laboratorio experimentado en aislamiento bacteriano será capaz de aislar e identificar correctamente App. Sin embargo, en ciertos países europeos (p.e. España, Bélgica, Francia) existen cepas atípicas de App (llamadas cepas del biotipo II) que pueden ser una complicación para algunos laboratorios.
   
• La identificación del serotipo puede ser importante: indica el nivel de riesgo en una explotación afectada. Los serotipos muy virulentos son patógenos primarios; los de virulencia intermedia suelen provocar mortalidad en granjas de estatus sanitario elevado o en presencia de coinfecciones y/o otros factores predisponentes. Conocer el serotipo también resulta útil para identificar qué bacterina comercial puede utilizarse en cada granja concreta. Finalmente, hay que conocer la distribución de serotipos virulentos en una zona para evaluar el riesgo de que existan granjas infectadas subclínicamente (ver más adelante). Actualmente el serotipado se realiza mediante PCR y está disponible en cualquier laboratorio diagnóstico.

El diagnóstico de la forma crónica es un poco más difícil

• Las lesiones de pleuritis observadas en matadero son bastante típicas pero no necesariamente patognomónicas.
   
• La detección de App en estas lesiones, especialmente cuando son relativamente viejas, es muy difícil y se suelen obtener falsos negativos.
   
• Muy a menudo hay coinfecciones (como Mycoplasma hyopneumoniae) que complican el diagnóstico.
   
• Si hay algún signo clínico, puede realizarse un sero-perfil utilizando ELISA específico para la toxina ApxIV (ver más adelante), primero ante la presencia de signos clínicos y después tras 21-28 días, para confirmar una clara sero-conversión.
   
• En ausencia de signos clínicos, las lesiones en matadero junto a resultados claramente positivos y elevados del ELISA para toxina ApxIV podrían ser una indicación de infección por App: deben analizarse entre 25 y 30 muestras séricas. Si son positivas, deben tomarse muestras séricas transversales para confirmarlo: 10 muestras semanales entre las 10 y las 20 semanas de vida. Una granja susceptible de estar afectada por App sería la que tuviese resultados serológicos claros que aumentasen durante este periodo.
   
• En ausencia de signos clínicos, las lesiones en matadero junto a resultados positivos de ELISA basada en lipopolisacáridos (LPS) (ver más adelante) para un serotipo virulento (en un país concreto) es un indicativo de infección por App. Pueden tomarse muestras séricas en matadero (entre 25 y 30 muestras séricas).

 

El diagnóstico de granjas infectadas subclínicamente debe realizarse mediante serología

Debido a la ausencia de signos clínicos o lesiones, no es fácil diagnosticar las infecciones subclínicas de App. Normalmente los animales no están afectados (conversión, crecimiento, etc). Esto es importante para las granjas reproductoras ya que los animales infectados subclínicamente pueden actuar como "animales portadores" que transmitan la App desde sus amígdalas hacia otros animales más susceptibles. Una cepa virulenta puede no inducir enfermedad en una granja pero puede causar una mortalidad elevada en otra más susceptible. Incluso dentro de una misma granja, los cambios de manejo, condiciones ambientales o la llegada de coinfecciones, pueden transformar una infección subclínica por una cepa virulenta en un brote de pleuroneumonía. La serología es una herramienta importante para diagnosticar las granjas infectadas subclínicamente. Surgen dos preguntas:

a) ¿Qué test debe utilizarse?

Hay dos tipos de ELISA disponibles: ELISA Apxiv específico para App (detecta todas las cepas de App sin distinguir el serotipo) y las específicas de cada serotipo basadas en lipopolisacáridos (ver tabla 1).

Tabla 1: Uso de los ELISA disponibles para detectar anticuerpos frente a App

	ELISA ApxIV específico para ELISA	ELISA LPS específico para serotipos/serogrupos
Explotaciones comerciales	No es útil (la mayoría de las granjas darán resultados positivos)	Sólo es útil si se analizan serotipos virulentos
Granjas con un elevado estatus sanitario (confirmadas como libres de App)	Útil	No es útil (analizar todos los serotipos individualmente es demasiado caro)
Sensibilidad (tras infecciones experimentales)	+++	++++
Especificidad (infecciones experimentales con otras especies bacterianas)	++++	+++
Uso rutinario para la evaluación de reproductores en diversos países	No	Sí

El test Apxiv será positivo en cualquier granja infectada por App (cepas virulentas o no virulentas). Más del 70% de las explotaciones comerciales de la mayoría de los países serían positivas a este test. Los tests basados en LPS deben orientarse a los serotipos más importantes y virulentos, que proporcionarán el nivel de riesgo de una granja concreta. Los países necesitan conocer la distribución de los serotipos virulentos: para disponer de esta información deben serotiparse las cepas aisladas de animales enfermos.
 

b) ¿Cuántas muestras y qué animales deben elegirse para hacer un diagnóstico en una granja infectada? ¿Cuán a menudo debe analizarse una granja para categorizarla como "granja no infectada"?

Recomendamos unas 30 muestras séricas al final del periodo de acabado; en sistemas de bandas deben analizarse distintos lotes para evitar falsos negativos. No hay una regla universal para certificar que una granja es "libre", pero se recomienda repetir los análisis al menos 2-3 veces al año.

 

Finalmente, los resultados serológicos poco concluyentes pueden complicar el diagnóstico en las granjas reproductoras. En dichos casos, puede detectarse App en amígdalas mediante PCR de animales sero-positivos. Si la granja es positiva a distintos serotipos virulentos y no virulentos, debe realizarse una PCR específica para un serotipo (para el serotipo virulento detectado mediante serología). En las granjas que se supone que son libres de App, puede utilizarse una PCR específica para App (para todos los serotipos). Estos tests deben realizarse en laboratorios experimentados y, sin embargo, en algunos casos todavía se obtienen falsos negativos o falsos positivos.