Diagnóstico laboratorial: Fiebre aftosa

Test disponibles:

Patología macroscópica

• Identificación de lesiones, especialmente vesículas en las zonas del hocico y las patas.
• Pros:
  • Fácil identificación macroscópica de las vesículas.
• Contras:
  • Clínicamente no se distingue del resto de enfermedades vesiculares.
  • Suele requerir otra confirmación diagnóstica.

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

• Detecta la presencia de una secuencia específica de ácido nucleico viral (ARN).
• Tipos de muestras: líquido vesicular o epitelio (tipo de muestra preferido), suero, muestra esofágico-laríngea (cuando no se dispone de vesícula o epitelio), leche.
• Pros:
  • Método más sensible y de preferencia para detectar el agente.
  • A menudo se pueden agrupar muestras para reducir el costo y minimizar la pérdida de sensibilidad.
  • Puede dirigirse a proteínas universales para la detección general o a proteínas específicas del serotipo para el serotipado.
• Contras:
  • Costo moderado.
  • Requiere primers (cebadores) adecuados, especialmente si se dirige a proteínas estructurales que son específicas del serotipo.

Lista de serotipos que se conocen actualmente para la fiebre aftosa (No existe protección cruzada entre serotipos):

• Asia 1
• Sudáfrica Tipo 1 (SAT 3)
• Sudáfrica Tipo 1 (SAT 2)
• Sudáfrica Tipo 1 (SAT 1)
• C
• A
• O

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas de detección de antígenos (Ag-ELISA)

• Detecta la presencia del antígeno.
• Tipos de muestras: líquido vesicular o epitelio (tipo de muestra preferido), suero, muestra esofágico-laríngea (cuando no se dispone de vesícula o epitelio), leche.
• Pros:
  • Método de elección para la detección e identificación del serotipo.
  • Puede utilizarse en el diagnóstico de un solo animal o a nivel de granja.
  • Puede utilizarse para diferenciar serotipos.
  • Cualquier resultado positivo al virus de campo se considera significativo.

Tabla 1. Se pueden usar diferentes proteínas víricas para ayudar en los objetivos de diagnóstico.

Antígeno diana	Variabilidad	Uso
Proteínas estructurales	Variable	Serotipado
Proteínas no estructurales	Conservada	Detección universal: No específica del serotipo

• Contras:
  • La presencia de antígeno viral puede ser específica del serotipo.
  • Puede ser necesario realizar múltiples pruebas para identificar los serotipos.

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas de detección de anticuerpos (Ab-ELISA)

• Detecta la presencia de anticuerpos.
• Tipos de muestra: suero.
• Pros:
  • Los anticuerpos circulantes pueden detectarse entre 3 y 5 días después de la aparición de los signos clínicos.
  • Los animales permanecen positivos durante varios meses.
  • Puede utilizarse en casos más antiguos.
  • Puede utilizarse para diferenciar la exposición al virus de campo de algunas vacunas muertas/recombinantes (dirigidas a proteínas no estructurales específicas).
  • Cualquier resultado positivo al virus de campo se considera significativo.
• Contras:
  • La respuesta de los anticuerpos es específica del serotipo.
  • Algunos animales pueden permanecer seropositivos durante varios años.
  • La fuerza de la respuesta inmune puede variar con la virulencia de la cepa.
  • La presencia de anticuerpos no siempre se correlaciona con la protección.

Dispositivos de flujo lateral

• Detecta la presencia del antígeno.
• Tipos de muestras: líquido vesicular o epitelio.
• Pros:
  • Método de elección para la detección e identificación del serotipo.
  • Puede utilizarse en el diagnóstico de un solo animal o a nivel de granja.
  • Puede utilizarse para diferenciar serotipos.
  • Cualquier resultado positivo al virus de campo se considera significativo.
• Contras:
  • La presencia de antígeno viral puede ser específica del serotipo.
  • Menos sensible que Ag-ELISA
  • Puede ser necesario realizar múltiples pruebas para identificar los serotipos.

Aislamiento del virus

• Aísla el virus vivo.
• Tipos de muestras: líquido vesicular o epitelio (tipo de muestra preferido), suero, muestra esofágico-laríngea (cuando no se dispone de vesícula o epitelio), leche.
• Pros:
  • Criterio de referencia.
  • Aislamiento del virus para utilizarlo en el desarrollo de vacunas (vacunas autógenas) o pruebas serológicas (ELISA) para determinar el serotipo.
• Contras:
  • Caro.
  • Resultados lentos.
  • Requiere líneas celulares especiales; células tiroideas de bovino (ternero) o células renales de cerdo, ternero o cordero.
  • El proceso de inoculación es muy laborioso.
  • A menudo difícil de cultivar (muchos falsos negativos).

Secuenciación genética

• Secuencia segmentos genéticos del ácido nucleico (ARN) del virus.
• Tipos de muestras: líquido vesicular o epitelio (tipo de muestra preferido), suero, muestra esofágico-laríngea (cuando no se dispone de vesícula o epitelio), leche.
• Pros:
  • Puede ayudar con la epidemiología molecular.
  • Ayuda a identificar el serotipo.
• Contras:
  • Caro.
  • Resultados lentos.

Interpretación de resultados:

Lesiones macroscópicas (vesículas)

• Positivo: Debe investigarse como posible fiebre aftosa.
• Negativo: Negativo o no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección o si la infección es por una cepa leve.

PCR

• Positivo: El virus está presente.
• Negativo: Negativo o el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección.

Ag-ELISA

• Positivo: El virus está presente.
• Negativo: Negativo, el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección o si se ha analizado un serotipo incorrecto.

Ab-ELISA

• Positivo: Anticuerpos maternales o exposición anterior (>2-3 días) a virus de campo o algunas vacunas.
• Negativo: Negativo o exposición a vacuna o virus de campo demasiado reciente para ser detectada o se ha analizado para unos anticuerpos de serotipo incorrecto.

Dispositivos de flujo lateral

• Positivo: El virus está presente.
• Negativo: Negativo, el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección o si se ha analizado un serotipo incorrecto.

Aislamiento del virus

• Positivo: El virus está presente.
• Negativo: Negativo, el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección o si se ha utilizado una línea celular incorrecta.

Secuenciación genética

• Positivo: El virus está presente.
• Negativo: Negativo, el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección o hay muy poco virus presente para la secuenciación.

Escenarios

Es importante tener en cuenta que en algunos países es posible que sea necesario la aprobación de las autoridades competentes antes de poder realizar cualquier prueba de detección de la fiebre aftosa.

Sospecha de brote agudo de fiebre aftosa en cerdos de cualquier edad y la granja no está vacunada para fiebre aftosa

• Recoge líquido vesicular de varios animales afectados y analízalo mediante Ag-ELISA o PCR; para la PCR puede considerarse la agrupación de muestras.

Sospecha de brote agudo de fiebre aftosa en cerdos de cualquier edad y la granja está vacunada para fiebre aftosa

• Recoge líquido vesicular de varios animales afectados y analízalo mediante Ag-ELISA o PCR; para la PCR puede considerarse la agrupación de muestras.
• Recoge suero de varios animales afectados que hayan mostrado signos clínicos durante al menos 3 días y analízalo individualmente mediante Ab-ELISA; dirigir a proteína no estructural que no está presente en la vacuna.

Sospecha de circulación de fiebre aftosa en cerdos de cualquier edad sin signos clínicos y la granja no está vacunada para fiebre aftosa

• Recoge suero de 30 cerdos muestreados aleatoriamente y analízalo individualmente mediante Ab-ELISA; dirigir a proteína estructural.

Sospecha de circulación de fiebre aftosa en cerdos de cualquier edad sin signos clínicos y la granja está vacunada para fiebre aftosa

• Recoge suero de 30 cerdos muestreados aleatoriamente y analízalo individualmente mediante Ab-ELISA; dirigir a proteína no estructural que no está presente en la vacuna.