Detección de Actinobacillus pleuropneumoniae en muestras de fluidos orales obtenidas de cerdos

Si bien se han realizado estudios sobre la utilización de cuerdas de algodón para la toma de muestras de fluidos orales y su posterior análisis para presencia de virus, su uso para la detección de patógenos bacterianos mediante PCR no ha sido estudiada. El objetivo del presente estudio fue, pues, evaluar a través del tiempo, los fluidos orales para el diagnóstico de Actinobacillus pleuropneumoniae, utilizando muestras de cerdos experimentalmente infectados.

Para ello, un total de 80 cerdos de 6 semanas de vida fueron asignados al azar a uno de 8 grupos experimentales (10 cerdos/grupo) e inoculados vía intranasal con los serovares 1, 3, 5, 7, 10, 12 ó 15 de Actinobacillus pleuropneumoniae o grupo control no inoculado.

Las cuerdas de algodón fueron colgadas en un área limpia del corral y alejada de los bebederos y comederos. Se permitió a los cerdos masticar las cuerdas de 20 a 30 minutos justo antes de la inoculación (día 0), el día 1 y posteriormente de forma semanal (días 7, 14, 28, 35, 42 y 49 post-inoculación). Se tomaron también muestras de sangre el día 0 y semanalmente. Los sueros fueron evaluados para presencia de anticuerpos frente a A. pleuropneumoniae. Todos los cerdos fueron sacrificados a los 49 días después de la infección (dpi) y se realizaron exámenes post-mortem para evaluar la presencia y la gravedad de las lesiones debidas por A. pleuropneumoniae. Se realizó también la detección de Haemophilus parasuis y Streptococcus suis en los fluidos orales recogidos de todos los grupos como control para el procesamiento de muestras, la extracción de ADN, y la posible presencia de inhibidores de la PCR en los fluidos orales.

Se recogieron una media de 5 ml de fluidos orales a partir de cada cuerda. Actinobacillus pleuropneumoniae fue detectado mediante PCR en las muestras recogidas el día 1 en el grupo inoculado con el serovar 3 y el día 7 en los grupos inoculados con los serovares 7 y 10. Actinobacillus pleuropneumoniae no fue detectado por PCR en las muestras de cerdos inoculados con los serovares 1, 5, 12 o 15. Actinobacillus pleuropneumoniae no se cultivó a partir de las muestras de fluido oral recogidas durante todo el experimento. Los cerdos inoculados con los serovares 5 (n = 1), 7 (n = 4), 10 (n = 4) y 15 (n = 2) mostraron leves adhesiones focales fibrosas entre la superficie de los pulmones y la pleura parietal en las necropsias realizadas a los 49 dpi. Los cerdos inoculados con los serovares 7 y 10 también mostraron lesiones pulmonares. No se observaron lesiones específicas en los cerdos inoculados con los serovares 1, 3 o 12.

Los resultados obtenidos permiten concluir que la prueba de fluidos orales tiene el potencial de ser una prueba de discriminación para la detección de patógenos bacterianos porcinos. Se recomiendan estudios de campo para explorar este potencial con más profundidad.