Diagnóstico laboratorial: Actinobacillus pleuropneumoniae (APP)

Test disponibles:

Patología macroscópica

• Evalúa la presencia de lesiones en tejidos que pueden ser casi diagnósticas de la enfermedad.
• Ubicación de las lesiones: pulmón.
• Zonas de consolidación necrohemorrágica en el pulmón acompañadas de pleuritis fibrinosa (figura 1).

• Pros:
  • El diagnóstico presuntivo puede realizarse tras un examen macroscópico de los pulmones.
• Contras:
  • Actinobacillus suis puede causar algunas lesiones similares aunque menos graves.
  • No identifica el serotipo.

Cultivo bacteriano

• Aislamiento de organismos vivos.
• Tipos de muestras: pulmón.
• Pros:
  • Puede realizarse en cualquier laboratorio (incluso interno).
  • Biotipo I requiere NAD (normalmente proporcionada por una colonia cultivada de Staphylococcus aureus).
  • Biotipo II no requiere NAD.
  • Coste relativamente bajo.
• Contras:
  • No siempre fácil de cultivar.
  • No identifica el serotipo.
  • Si los cerdos han sido tratados previamente con antibióticos, esto puede impedir el crecimiento bacteriano.

Susceptibilidad antimicrobiana (antibiograma)

• Test in vitro: capacidad de un organismo vivo para crecer bajo concentraciones específicas de diferentes antimicrobianos.
• Tipos de muestras: pulmón.
• Pros:
  • Identificación de susceptibilidad o resistencia de cepas específicas a antimicrobianos comunes.
  • Identificación de tendencias de resistencia a los antimicrobianos.
• Contras:
  • Requiere un aislado bacteriano.
  • Las pruebas in vitro pueden diferir ligeramente de los resultados in vivo.
  • Es posible que algunos antimicrobianos específicos no se incluyan o requieran pruebas especiales separadas.
  • Coste moderado.

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) General o Serotipado

• Detecta la presencia de secuencias específicas de ácido nucleico bacteriano (ADN).
• Tipos de muestras: pulmón y tonsila.
• Pros:
  • Sensibilidad alta.
  • General
    • Se dirige a los genes de la toxina ApxIV.
    • Presente en todos los serotipos de APP.
  • Serotipado
    • Se dirige a diferentes partes de los genes de las toxinas ApxI, ApxII y ApxIII.
    • Ver la tabla 1 para el serotipado y la producción de toxinas.
  • Coste moderado.
    • A menudo se pueden combinar muestras de tejidos para reducir el coste y minimizar la pérdida de sensibilidad.
• Contras:
  • Requiere varios primers (cebadores) específicos para determinar el serotipo.
  • No todas las cepas se pueden tipificar.
    • Actualmente hay 19 serotipos identificados y este número seguirá aumentando.
  • No todas las pruebas están validadas para analizar muestras de tonsila.

Tabla 1: Producción de toxinas para cada serotipo.

	Producción de toxinas
Serotipo	ApxI	ApxII	ApxIII	ApxIV
1	X	X		X
2		X	X	X
3		X	X	X
4		X	X	X
5	X	X		X
6		X	X	X
7		X		X
8		X	X	X
9	X	X		X
10	X			X
11	X	X		X
12		X		X
13		X		X
14	X			X
15		X	X	X
16	X	X		X
17		X		X
18		X		X
19		X		X

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) Antígeno LPS-O

• Detecta la presencia de anticuerpos.
• Tipos de muestras: suero.
• Objetivo: Antígeno LPS-O.
• Pros:
  • Puede ser útil para ayudar con el serotipado.
  • Sensibilidad alta.
• Contras:
  • Gran cantidad de reactividad cruzada entre serotipos debido a que comparten epítopos capsulares y de antígeno LPS-O.
    • Los siguientes serotipos presentan reacción cruzada debido a que comparten antígenos LPS-O:
      • Reacción cruzada entre los serotipos 1, 9 y 11.
      • Reacción cruzada entre los serotipos 3, 6, 8, 15, 17 y 19.
      • Reacción cruzada entre los serotipos 4, 7 y 18.
  • No determina el serotipo específico con una sola prueba.
  • Muy caro y poco práctico realizar pruebas para todos los serotipos.

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) Antígeno ApxIV

• Detecta la presencia de anticuerpos.
• Tipos de muestras: suero.
• Objetivo: Antígeno ApxIV.
• Pros:
  • Sensibilidad alta.
  • Detecta todos los serotipos de APP.
• Contras:
  • No determina el serotipo específico.
  • No determina la virulencia de las cepas.

Interpretación de resultados:

Patología macroscópica

• Positivo: A menudo el diagnóstico presuntivo es suficiente.
• Negativo: Sin lesiones pulmonares macroscópicas.

Cultivo bacteriano

• Positivo:
  • Biotipo 1: dependiente de NAD.
  • Biotipo 2: independiente de NAD.
• Negativo: Negativo o animal posiblemente tratado previamente con antibióticos.

Susceptibilidad antimicrobiana (antibiograma)

• Susceptible: posible buena elección para el tratamiento si el antimicrobiano puede llegar al tejido diana.
• Resistente: hay que seleccionar un antimicrobiano diferente.
• MIC: si se realiza la MIC (mínima concentración inhibitoria) hay que asegurarse que el antimicrobiano seleccionado alcanza el valor MIC indicado en el órgano diana.

PCR

• Positivo:
  • Organismo presente.
  • Puede identificar la presencia de diferentes genes que ayudan al serotipado.
• Negativo:
  • Negativo o infección demasiado antigua.
  • Animal posiblemente tratado previamente con antibióticos.
  • No todas las cepas se pueden serotipar (no tipificable).

ELISA Antígeno LPS-O

• Positivo: ayuda a determinar el serotipo o identificar un grupo de serotipos.
• Negativo: negativo, infección demasiado antigua o animal posiblemente tratado previamente con antibióticos.

ELISA Antígeno ApxIV

• Positivo: Organismo presente.
• Negativo: negativo, infección demasiado antigua o animal posiblemente tratado previamente con antibióticos.

Escenarios:

Cerdos de engorde con muerte súbita o enfermedad respiratoria (aguda)

• Necropsia 1-3 cerdos muertos recientemente o eutanasia cerdos con tos. Evalúa macroscópicamente los pulmones en busca de zonas de consolidación necrohemorrágica acompañadas de pleuritis fibrinosa.
• Envía los pulmones afectados para cultivo bacteriano y pruebas PCR generales para APP y, si son positivas, realiza PCR de serotipado.

Establecer el estado negativo de la granja

• Toma muestras de 30 de los cerdos de engorde más grandes de la granja y analízalos 2-3 veces al año usando ELISA ApxIV.