Diagnóstico laboratorial: Disentería porcina (Brachyspira hyodysenteriae)

Test disponibles:

Cultivo bacteriano

• Aislamiento de organismos vivos.
• Tipo de muestra: heces.
• Pros:
  • Relativamente barato.
  • La presencia de Brachyspira spp. fuertemente beta-hemolíticas está asociada a la virulencia.

Tabla 1: Relación entre la beta-hemólisis en Brachyspira spp. y la enfermedad.

Brachyspira spp.	Beta-hemólisis	Enfermedad
B. hyodysenteriae	Fuerte	Lesiones de la disentería porcina
B. hampsonii	Fuerte	Lesiones de la disentería porcina
B. suanatina	Fuerte	Lesiones de la disentería porcina
B. pilosicoli	Débil	Colitis por espiroquetas
B. murdochii	Débil	Colitis por espiroquetas
B. intermedia	Débil	Colitis por espiroquetas
B. innocens	Débil	No patógena

• Contras:
  • Menos sensible que la prueba PCR.
  • Crecimiento lento (hasta 10 días).
  • Requiere cultivo anaerobio.
  • Algunas cepas menos virulentas pueden encontrarse en granjas sin signos clínicos o lesiones.

Susceptibilidad antimicrobiana

• Test in vitro: capacidad de un organismo vivo para crecer bajo concentraciones específicas de diferentes antimicrobianos.
• Tipo de muestra: heces.
• Pros:
  • Identificación de susceptibilidad o resistencia de cepas específicas a antimicrobianos comunes.
• Contras:
  • Requiere un aislado bacteriano.
  • Las pruebas in vitro pueden diferir ligeramente de los resultados in vivo.
  • Es posible que algunos antimicrobianos específicos no se incluyan o requieran pruebas especiales separadas.
  • Costo moderado.
  • Los resultados tardan 7 días.

Histopatología

• Evalúa la presencia de lesiones en tejidos que pueden confirmar la presencia de enfermedad.
• Tipo de muestra: tejidos.
• Pros:
  • Las lesiones histopatológicas pueden ser muy sugestivas si se encuentran muchas espiroquetas cerca de las lesiones intestinales.
  • Puede detectar formas leves de la enfermedad.
• Contras:
  • Se necesita fijar con formol los tejidos intestinales de un animal muerto recientemente.
  • Las lesiones son similares a otras enfermedades.

Frotis de impresión

• Detecta la presencia de bacterias.
• Tipos de muestra: tejido del intestino grueso, heces.
• Pros:
  • Fácil de realizar.
    • Tinción no específica.
    • Microscopía de campo oscuro.
  • Se puede hacer un diagnóstico presuntivo detectando un gran número de espiroquetas.
  • Puede identificar cantidades bajas, moderadas o altas de bacterias presentes.
• Contras:
  • Requiere la presencia de un número significativamente mayor de bacterias en comparación con el cultivo o la PCR.
  • No evalúa la capacidad hemolítica de los aislados y, por lo tanto, no diferencia entre cepas no patógenas, colitis por espiroquetas y disentería porcina.

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

• Detecta la presencia de una secuencia específica de ácido nucleico bacteriano (ADN).
• Tipos de muestra: tejido intestinal, hisopos fecales, heces.
• Pros:
  • Alta sensibilidad.
  • La cuantificación por PCR se asocia con la presencia de lesiones.
  • Costo moderado.
    • A menudo se pueden combinar muestras de heces o tejidos para reducir el costo y minimizar la pérdida de sensibilidad (especialmente en lo que respecta a la relevancia clínica).
• Contras:
  • Alta sensibilidad – confirma la presencia de bacteria pero no de enfermedad.
  • Se necesitan primers (cebadores) adecuados para detectar y diferenciar entre Brachyspira spp.

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta la presencia de anticuerpos.
• Tipo de muestra: suero.
• Pros:
  • Puede detectar la infección a nivel de explotación.
  • Los anticuerpos pueden durar varios meses.
  • Los niveles séricos de IgG se correlacionan con la duración de los signos clínicos.
• Contras:
  • Las pruebas no se consiguen fácilmente.
  • Baja sensibilidad y especificidad.
    • Se utilizan para la detección a nivel de explotación y no para el diagnóstico individual de los animales.
  • Los anticuerpos específicos y el momento de la detección pueden variar ligeramente entre los distintos kits comerciales disponibles.
  • A menudo, los antígenos utilizados pueden ser específicos de especies concretas de Brachyspira.
  • No existe correlación entre los niveles de anticuerpos y la protección.
  • Se desconoce la protección cruzada entre Brachyspira spp.

Interpretación de resultados:

Cultivo bacteriano

• Positivo: bacteria presente.
  • Beta-hemólisis fuerte – disentería porcina.
  • Beta-hemólisis débil – colitis por espiroquetas o no patógena.
• Negativo: Negativo, animal posiblemente tratado previamente con antibióticos o demasiado tarde en la infección.

Susceptibilidad antimicrobiana

• Susceptible: posible buena elección para el tratamiento si el antimicrobiano puede llegar al tejido diana.
• Resistente: hay que seleccionar un antimicrobiano diferente.
• MIC: si se realiza la MIC (mínima concentración inhibitoria) hay que asegurarse que el antimicrobiano seleccionado alcanza el valor MIC indicado en el órgano diana.

Histopatología

• Positivo: Las espiroquetas encontradas cerca de las lesiones son un diagnóstico presuntivo.
• Negativo: No hay lesiones intestinales.

Frotis de impresión

• Cantidad de espiroquetas presentes:
  • Alta: muy sugestivo de enfermedad.
  • Moderada: interpretación variable.
  • Baja: valor dudoso (podría tratarse de una condición no patógena o crónica)
  • No presente: animal posiblemente tratado previamente con antibióticos o contribuyente no significativo.

PCR

• Positivo: confirma la presencia de bacteria.
• Negativo: Negativo o infección demasiado antigua para detectar la bacteria o animal tratado previamente con antibióticos.

ELISA

• Positivo: Exposición anterior (>2-4 semanas) a vacuna o bacteria de campo.
• Negativo:
  • Negativo a vacuna o bacteria de campo.
  • Infección demasiado antigua para detectarla.
  • El uso de antibióticos puede inhibir el crecimiento bacteriano y disminuir la respuesta inmunitaria.

Escenarios:

Cerdos de engorde con diarrea (aguda)

• Recoge muestras fecales de 10 o más cerdos con diarrea no tratados con antibióticos y envíalas para cultivo bacteriano y PCR en pooles de 5.
• Necropsia 1-3 cerdos muertos recientemente o eutanasia cerdos con diarrea. Evalúa macroscópicamente el intestino grueso (especialmente el ciego y colon espiral) y fija en formol para histopatología.

Antecedentes crónicos de diagnóstico de disentería porcina pero sin signos clínicos observados

• Recoge muestras de heces de 4-6 corrales y envíalas para PCR.
• Recoge muestras de 15-20 cerdos a las 14 y 18 semanas de edad.
  • Dos enfoques para la recogida:
    • Transversal – recoge de diferentes grupos de edad a la vez (se obtienen resultados más rápido).
    • Longitudinal – recoge de los mismos cerdos a lo largo del tiempo (se obtienen resultados más precisos).
  • Análisis de muestras de suero mediante ELISA.