Diagnóstico laboratorial: Rotavirus

Existen tres grupos principales de rotavirus que causan diarrea en cerdos: Rotavirus A, Rotavirus B y Rotavirus C. Cada grupo de virus es diferente de los demás y requiere pruebas específicas diseñadas para ellos. La diarrea en cerdos a menudo implica infecciones con múltiples grupos de rotavirus al mismo tiempo.

Test disponibles:

Patología macroscópica

• Evalúa la presencia de adelgazamiento de la pared del intestino delgado que puede sugerir la presencia de enfermedad.
• Ubicación de las lesiones: yeyuno e íleon.
• Pros:
  • Resultados rápidos y económicos
  • Aplicable a los tres grupos de rotavirus
• Contras:
  • No diagnóstico – se pueden encontrar lesiones similares con otras enfermedades especialmente las infecciones por coronavirus (gastroenteritis transmisible, diarrea epidémica porcina y delta coronavirus porcino)
  • Requiere tejidos frescos (<15 min) ya que la descomposición cambia drásticamente la apariencia del intestino delgado
  • No distingue entre los diferentes grupos de rotavirus

• Evalúa la presencia de lesiones en los tejidos (atrofia en las vellosidades del intestino delgado) que pueden sugerir firmemente la presencia de enfermedad.
• Tipos de muestras: tejido del yeyuno e íleon.
• Pros:
  • Confirma la atrofia de las vellosidades que sugieren enteritis viral
• Contras:
  • Se necesita fijar con formol los tejidos intestinales en menos de 15 minutos tras la muerte del animal. El tejido intestinal se descompone rápidamente

Inmunohistoquímica (IHC)

• Detecta la presencia de antígeno viral.
• Tipos de muestras: tejido del yeyuno e íleon.
• Pros:
  • Diagnóstico definitivo: puede confirmar la presencia del virus con lesiones asociadas
• Contras:
  • Solo disponible actualmente para Rotavirus A y Rotavirus C (no disponible para Rotavirus B)

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

• Detecta la presencia de una secuencia específica de ácido nucleico viral (ARN)
• Tipos de muestras: tejidos intestinales de yeyuno e íleon, hisopos fecales, heces.
• Pros:
  • PCR Multiplex puede detectar diferentes grupos de rotavirus, incluyendo Rotavirus A, Rotavirus B y Rotavirus C
  • Alta sensibilidad.
  • Cuantificación por PCR
  • Costo moderado
    • A menudo se pueden agrupar muestras de heces o tejidos para reducir el costo y minimizar la pérdida de sensibilidad (especialmente en lo que respecta a la relevancia clínica).
• Contras:
  • Alta sensibilidad – puede confirmar la presencia del virus pero no la enfermedad (alta prevalencia del virus en el medio ambiente)

Aislamiento del virus

• Aísla el virus vivo.
• Tipos de muestras: tejidos intestinales de yeyuno e íleon, hisopos fecales, heces.
• Pros:
  • Aislamiento del virus para utilizarlo en el desarrollo de vacunas (vacunas autógenas)
• Contras:
  • Caro
  • Resultados lentos
  • Solo disponible actualmente para Rotavirus A y no para Rotavirus B o Rotavirus C
  • A menudo difícil de cultivar (muchos falsos negativos)
  • La manipulación de las muestras desde el campo hasta el laboratorio puede afectar a la supervivencia del virus

Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA)

• Detecta la presencia de anticuerpos.
• Tipos de muestras: suero.
• Pros:
  • Los animales permanecen positivos durante varias semanas
  • Puede identificar granjas negativas
• Contras:
  • La alta prevalencia del virus en el medio ambiente resulta en una exposición común en muchos/mayoría de cerdos
  • Requiere una prueba específica para cada grupo de rotavirus
  • No hay protección cruzada entre los diferentes grupos de rotavirus

Tabla 1. Resumen de las pruebas aplicables con respecto a los diferentes grupos de rotavirus.

Interpretación de resultados:

Patología macroscópica

• Positivo: Confirmación preliminar de la presencia de adelgazamiento intestinal.
• Negativo: Los casos tempranos o leves pueden no manifestar lesiones intestinales extensas.

Histopatología

• Positivo: Confirmación de enfermedad, per no de la causa de la enfermedad.
• Negativo: Negativo o las lesiones no se detectan si se analiza una muestra incorrecta o se realiza mucho después de la infección.

IHC

• Positivo: El virus está presente en el sitio de la lesión.
• Negativo: Negativo o el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección o la concentración de virus es demasiado baja (sólo está presente por un corto período de tiempo).

PCR

• Positivo: Confirmación de presencia de los diferentes grupos de rotavirus (A, B y C).
• Negativo: Negativo, el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección o por una selección o manipulación incorrecta de la muestra.

Aislamiento del virus

• Positivo: Confirmación de presencia del virus pero no de enfermedad.
• Negativo: Negativo, el virus no se detecta si la prueba se realiza mucho después de la infección o simplemente no puede crecer debido a otra contaminación o una mala manipulación (presente pero muy difícil de cultivar). No detecta Rotavirus B o Rotavirus C.

ELISA

• Positivo: Exposición anterior (> 2-4 semanas) a vacuna o virus de campo. Sin asociación de positividad y enfermedad.
• Negativo:
  • Negativo a vacuna o virus de campo
  • Infección demasiado reciente para ser detectada

Escenarios:

Lechones recién nacidos con diarrea (aguda o crónica)

• Recoge muestras fecales de 10 o más cerdos con diarrea no tratados y envíalas para analizar mediante PCR para Rotavirus A, Rotavirus B y Rotavirus C en pools de 5.
• Necropsia 1-3 cerdos muertos recientemente o eutanasia cerdos con diarrea. Evalúa macroscópicamente el yeyuno e íleon en busca de adelgazamiento de la pared intestinal. Recoge muestras y fíjalas en formol para histopatología y IHC.

Lechones recién destetados con diarrea (aguda o crónica)

• Recoge muestras fecales de 10 o más cerdos con diarrea no tratados y envíalas para analizar mediante PCR para Rotavirus A, Rotavirus B y Rotavirus C en pools de 5.
• Necropsia 1-3 cerdos muertos recientemente o eutanasia cerdos con diarrea. Evalúa macroscópicamente el yeyuno e íleon en busca de adelgazamiento de la pared intestinal. Recoge muestras y fíjalas en formol para histopatología y IHC.