Entendiendo mejor la gripe porcina: Diagnóstico (1/3)

Las infecciones por el virus de la gripe A (IAV, por las siglas en inglés de Influenza A virus) plantean un gran desafío, tanto en la investigación como en la práctica, en todo el mundo, no sólo en cerdas sino también en lechones y cerdos de engorde. Actualmente, los virus de la gripe son endémicos en muchas granjas de cerdos, con un cuadro clínico muy variable y un diagnóstico que, a menudo, se complica por co-infecciones. En muchos casos, para la identificación del virus de la influenza involucrado en la enfermedad se requiere una detección del patógeno más allá del grupo de edad clínicamente afectado. La creciente dinámica en la evolución genética de los virus de la gripe y la variación en su infectividad y en la expresión de la enfermedad requiere experiencia y conocimientos para interpretar los resultados diagnósticos. En esta primera entrega de tres artículos consecutivos nos centraremos en las últimas noticias sobre el virus y su abordaje diagnóstico. En la segunda parte detallaremos la enfermedad clínica y las coinfecciones y en el tercer artículo ofreceremos una descripción general de las estrategias de control.

Los virus de la influenza A (IAV) en cerdos son virus ARN envueltos que pertenecen a la família Orthomyxoviridae. Una de sus características es que su genoma consiste en ocho segmentos de genes, cada uno de los cuales codifica, al menos, para una proteína. Dos de los ocho segmentos son responsables de las estructuras antigénicas de superficie conocidas como hemaglutinina (HA) y neuraminidasa (NA) (figura 1). Los IAV se clasifican en subtipos según estas estructuras y, hasta la actualidad, se han identificado dieciocho subtipos de HA y once de NA.

Hasta 2009 había, principalmente, tres subtipos circulando en porcino (swIAV), H1avN1, H1huN2 y H3huN2. En ese momento sólo se habían identificado unos pocos genotipos distintos, definidos por todos los segmentos del genoma. Este escenario cambió con la llegada de la cepa pandémica H1pdmN1pdm durante la pandemia de gripe en 2009. Datos publicados recientemente (Henritzi et al. 2020) muestran que, actualmente, hay 31 genotipos distintos de swIAV resultado del reagrupamiento genético de los ocho segmentos entre H1pdmN1pdm y los linajes previos de swIAV que estaban circulando en Europa. Esta vigilancia pasiva se llevó a cabo en 2.457 granjas en diecisiete países europeos entre 2015 y 2017. Reveló que swIAV puede detectarse en granjas durante todo el año por lo que, a diferencia de la gripe humana, no es estacional. Se encontraron diferencias en la distribución de los subtipos en las distintas regiones.

Existen diversos métodos de diagnóstico para la detección directa de swIAV. Debe elegirse el método y el número de muestras según la situación de la granja. Los hisopos nasales son adecuados para detectar proteínas de la matriz del IAV mediante PCR. Si es positivo con una carga viral adecuada, se puede realizar la tipificación mediante una RT-PCR específica para HA y NA. Debe tenerse en cuenta que los animales generalmente sólo excretan el virus durante 5-7 días tras la infección y lo eliminan de los pulmones en unos 9 días. Por lo tanto, es esencial el momento para la toma de muestras mediante métodos individuales (hisopos nasales, lavados broncoalveolares o de pulmones). Dado que el cuadro clínico a menudo está complicado por infecciones secundarias, swIAV puede ya no ser detectable cuando se produzcan los síntomas más severos. En el caso de infecciones con diversos subtipos de swIAV, no todos los subtipos involucrados serán detectados por igual. Especialmente en granjas con gripe endémica y síntomas clínicos poco claros, se recomienda usar métodos de cribado (muestras de frotis de ubre, muestras de fluidos orales) en diferentes grupos de edad.

Si se analizan cinco hisopos nasales en una muestra agrupada mediante PCR, prácticamente no hay pérdida de sensibilidad. Así se puede aumentar la tasa de detección, porque con los "pools" pueden procesarse más muestras con el mismo esfuerzo. Por lo tanto, el hisopo nasal sigue siendo crucial para el diagnóstico de la influenza. La buena calidad de la muestra a menudo permite la tipificación y el cultivo. Es importante que las muestras se envíen refrigeradas al laboratorio por mensajería urgente. En un brote agudo, las muestras deben tomarse de animales que se hayan puesto enfermos hace poco y que presenten fiebre. En las granjas infectadas endémicamente, debe ajustarse la selección de animales para el muestreo al hecho de que los animales con síntomas típicos como la temperatura elevada son menos evidentes. A menudo es posible la detección vírica temprana en lechones lactantes, sin signos clínicos visibles. Debido a que los anticuerpos maternales protegen contra la enfermedad, pero no contra la infección, los lechones lactantes pueden excretarlo y llevarlo a la transición. La mezcla de lechones permite una diseminación muy rápida del virus, por lo que el periodo inmediatamente tras el destete es un buen momento para el muestreo. También se deben tomar muestras de animales en grupos de edad que regularmente muestren signos clínicos (estornudos, resfriados, tos, fiebre, retrasos repentinos). Por lo tanto, están indicadas las pruebas transversales, muestreando distintos grupos de edad en el mismo momento para obtener la mejor visión general de las cepas de swIAV circulantes en la granja.

Como es un método indirecto (detección de anticuerpos), un test de inhibición de la hemoaglutinación (HI) en muestras séricas de animales preferiblemente no vacunados puede indicar que hay otros subtipos involucrados que no habían sido detectados previamente de forma directa. El HI se basa en el hecho de que los anticuerpos inhiben el efecto de coagulación sanguínea del IAV. Si el suero de un cerdo puede evitar la coagulación de la sangre por parte de las cepas del virus de la influenza que se han usado en el test, esto indica que el cerdo ha desarrollado anticuerpos específicos frente a subtipos similares. Por lo tanto, la HI ofrece una ventaja frente a ELISA, que sólo puede dar la información sobre Influenza A en general. Sin embargo, las muestras séricas de lechones hasta final de la transición a menudo no muestran la presencia de anticuerpos, aunque los animales hayan tenido contacto con swIAV en la transición. La seroconversión puede estar dificultada por los anticuerpos maternales, que llegan a los lechones no sólo de cerdas vacunadas sino de cerdas previamente infectadas. Por lo tanto, tomar muestras de sangre en transición no es conclusivo, sin embargo, muestras séricas pareadas de cerdos de engorde, nulíparas o cerdas pueden proporcionar buenos resultados.

Aunque los diagnósticos suelen ser muy laboriosos, son la única forma de determinar las cepas que circulan en la granja y el momento de la infección. Son un requisito previo para implementar las medidas de manejo y los protocolos de vacunación correctos.